Plasmide CRISPR/Cas9 KO Aquaporin 8/AQP8 (m): sc-419179

Présentation

Aqp8 code l’aquaporine 8 (AQP8), un canal membranaire qui facilite le déplacement rapide de l’eau et peut aussi contribuer, dans certains types cellulaires, au transport transmembranaire de petits solutés neutres tels que le peroxyde d’hydrogène. Dans les tissus de souris, l’expression d’AQP8 est associée à la gestion des fluides par les épithéliums et à la physiologie sécrétoire, et sa localisation subcellulaire a été rapportée à la fois dans la membrane plasmique et dans des membranes intracellulaires, ce qui étaye des rôles dans l’équilibre osmotique et l’homéostasie des organites. En influençant la perméabilité à l’eau et les flux de solutés liés au statut rédox, AQP8 s’inscrit à l’interface de processus tels que la fonction de barrière épithéliale, la physiologie mitochondriale et la signalisation du stress oxydant. Une activité ou une expression d’AQP8 dérégulée a été étudiée dans le contexte de phénotypes inflammatoires et métaboliques, de la physiologie hépatique et gastro-intestinale, ainsi que de perturbations plus larges de l’homéostasie rédox cellulaire, pertinentes pour des mécanismes pathologiques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Aquaporin 8/AQP8 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Aqp8 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Aqp8, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Aqp8 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Aquaporin 8/AQP8.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Aqp8 pour l'étude de la signalisation de Aquaporin 8/AQP8, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Aqp8 essentiels à la fonction de Aquaporin 8/AQP8
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Aqp8 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Aquaporin 8/AQP8 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Aquaporin 8/AQP8 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Aqp8. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Aquaporin 8/AQP8 plasmide HDR (m) et le Aquaporin 8/AQP8 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Aqp8 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Aqp8 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.