Plasmide CRISPR/Cas9 KO Aquaporin 5/AQP5 (m): sc-419176

Présentation

Aqp5 code l’aquaporine 5 (AQP5), un canal hydrique membranaire qui permet un passage rapide de l’eau, sous l’effet de gradients osmotiques, à travers les barrières épithéliales dans des tissus sécrétoires tels que les glandes salivaires et lacrymales ainsi que les voies aériennes. En régulant le transport liquidien transépithélial et en contribuant à l’homéostasie du volume des cellules épithéliales, AQP5 influence des processus tels que l’hydratation de la surface des voies aériennes, la sécrétion glandulaire et la fonction barrière. Des modifications de l’expression ou de la localisation d’AQP5 ont été associées à une dérégulation de la gestion des fluides et à un remodelage épithélial dans les maladies inflammatoires des voies aériennes, les dysfonctions des glandes exocrines et les réponses tissulaires liées à l’œdème. Dans les modèles murins, Aqp5 est fréquemment étudié dans le contexte de la différenciation épithéliale, du couplage entre le transport ionique et hydrique, et de la signalisation sensible au stress qui façonne la physiologie des muqueuses.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Aquaporin 5/AQP5 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Aqp5 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Aqp5, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Aqp5 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Aquaporin 5/AQP5.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Aqp5 pour l'étude de la signalisation de Aquaporin 5/AQP5, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Aqp5 essentiels à la fonction de Aquaporin 5/AQP5
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Aqp5 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Aquaporin 5/AQP5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Aquaporin 5/AQP5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Aqp5. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Aquaporin 5/AQP5 plasmide HDR (m) et le Aquaporin 5/AQP5 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Aqp5 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Aqp5 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.