Plasmide CRISPR d'Activation (h) Aquaporin 4/AQP4: sc-400258-ACT

AQP4 code l’aquaporine‑4, le principal canal à eau présent dans les pieds astrocytaires et d’autres membranes polarisées, où elle assure un flux d’eau rapide et bidirectionnel à travers la membrane plasmique. En couplant les mouvements osmotiques de l’eau au tamponnement du K+ et à la dynamique des fluides périvasculaires, AQP4 contribue à l’homéostasie hydrique cérébrale, à l’épuration glymphatique et à la régulation du volume de l’espace extracellulaire. Sa localisation aux domaines périvasculaires et sous‑piaux via des complexes associés à la dystrophine relie AQP4 à l’échafaudage membranaire et aux interactions astrocytaires avec le système neurovasculaire. Une expression modifiée d’AQP4 ou une mauvaise localisation est étudiée dans les contextes d’œdème cérébral, de dysfonction de la barrière hémato‑encéphalique, de neuroinflammation et de mécanismes des maladies démyélinisantes.

Aquaporin 4/AQP4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de AQP4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Aquaporin 4/AQP4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus AQP4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription AQP4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Aquaporin 4/AQP4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus AQP4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Aquaporin 4/AQP4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Aquaporin 4/AQP4 dans les cellules tumorales présentant une expression de AQP4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.