Plasmide CRISPR d'Activation (h) Aquaporin 3/AQP3: sc-400636-ACT

AQP3 humain code l’aquaporine 3, un canal membranaire qui facilite le transport de l’eau et du glycérol à travers les membranes des cellules épithéliales et immunitaires, influençant l’équilibre osmotique et le métabolisme cellulaire. En régulant le flux de glycérol, AQP3 peut affecter l’homéostasie énergétique, l’état redox et des processus de signalisation liés à la dynamique membranaire, à la prolifération et à la fonction barrière. Son activité est étudiée dans des contextes tels que la différenciation épithéliale, l’hydratation cutanée et la migration des cellules immunitaires, où une expression altérée a été rapportée dans des affections inflammatoires et de nombreux types de cancers. AQP3 est également utilisé comme marqueur et comme nœud fonctionnel dans des voies reliant le transport de solutés aux réponses cellulaires au stress et à l’adaptation au microenvironnement.

Aquaporin 3/AQP3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de AQP3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Aquaporin 3/AQP3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus AQP3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription AQP3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Aquaporin 3/AQP3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus AQP3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Aquaporin 3/AQP3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Aquaporin 3/AQP3 dans les cellules tumorales présentant une expression de AQP3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.