Plasmide CRISPR/Cas9 KO Aquaporin 2/AQP2 (h): sc-400402

Présentation

AQP2 code l’aquaporine-2, un canal hydrique régulé par la vasopressine qui contrôle la réabsorption osmotique de l’eau dans les cellules principales du tube collecteur rénal. En réponse à la signalisation AVPR2–AMPc–PKA, AQP2 subit un trafic dépendant de la phosphorylation vers la membrane apicale, en coordination avec le recyclage endocytique et la dynamique du cytosquelette, afin d’ajuster la perméabilité membranaire à l’eau. Cette voie intègre le contrôle hormonal de l’équilibre hydrique à la polarité épithéliale et aux processus de transport membranaire. Une dérégulation de l’expression, de la localisation ou du gating (ouverture/fermeture) d’AQP2 est associée à une diminution de la capacité de concentration des urines et constitue un nœud mécanistique dans les études de l’homéostasie de l’eau et du dysfonctionnement tubulaire rénal.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Aquaporin 2/AQP2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène AQP2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du AQP2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert AQP2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Aquaporin 2/AQP2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en AQP2 pour l'étude de la signalisation de Aquaporin 2/AQP2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de AQP2 essentiels à la fonction de Aquaporin 2/AQP2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de AQP2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Aquaporin 2/AQP2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Aquaporin 2/AQP2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus AQP2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Aquaporin 2/AQP2 plasmide HDR (h) et le Aquaporin 2/AQP2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie AQP2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles AQP2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.