Plasmide Double Nickase (m) Aquaporin 1/AQP1: sc-419172-NIC

Le gène murin *Aqp1* code l'aquaporine 1 (AQP1), un canal membranaire tétramérique qui assure un flux d'eau rapide et sélectif à travers les membranes plasmatiques et contribue au maintien de l'homéostasie osmotique. AQP1 est fortement exprimée dans l'endothélium microvasculaire et les tissus épithéliaux, où elle participe au transport liquidien transépithélial, à la régulation du volume cellulaire et à la fonction physiologique de barrière. Par ses effets sur la perméabilité membranaire et les gradients hydrostatiques/osmotiques, AQP1 influence des processus tels que la formation d'œdèmes, les réponses angiogéniques et la sécrétion de liquides. Une expression ou une localisation altérée d'AQP1 a été associée à des troubles de la concentration urinaire, à des dysfonctions vasculaires et à un déséquilibre de la répartition des fluides tissulaires, pertinents dans des microenvironnements inflammatoires et néoplasiques.

Aquaporin 1/AQP1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Aqp1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Aqp1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Aqp1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Aqp1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.