Plasmide Double Nickase (h) Aquaporin 1/AQP1: sc-400340-NIC

AQP1 (aquaporine 1) est un canal membranaire tétramérique qui facilite un transport rapide et sélectif de l'eau à travers la membrane plasmique, et contribue au maintien de l'équilibre osmotique et du volume cellulaire. Dans les tissus humains, elle est fortement exprimée dans les érythrocytes, le tubule proximal rénal et la branche descendante fine, le plexus choroïde et l'endothélium microvasculaire, soutenant des processus tels que le mouvement transépithélial des fluides et la perméabilité microvasculaire. Le flux d'eau dépendant d'AQP1 interfère avec les réponses au stress osmotique et aux signaux mécaniques, modulant la motilité cellulaire et l'homéostasie des fluides tissulaires. Une expression altérée d'AQP1 a été associée à une régulation perturbée des fluides et à des phénotypes liés à l'œdème, et elle est fréquemment étudiée dans des contextes incluant la physiologie rénale, l'angiogenèse et le remodelage du microenvironnement associé aux tumeurs.

Aquaporin 1/AQP1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus AQP1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de AQP1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de AQP1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de AQP1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.