apolipoprotein E/apoE Double Nickase Plasmid (h): sc-400860-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das apolipoprotein E/apoE Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- apolipoprotein E/apoE Double-Nickase-Plasmid (h) und apolipoprotein E/apoE Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf APOE abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: apolipoprotein E/apoE: sc-390925
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
apolipoprotein E/apoE Double Nickase Plasmid (h) | sc-400860-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
apolipoprotein E/apoE Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400860-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane **APOE**-Gen kodiert Apolipoprotein E (apoE), einen sezernierten Lipoprotein-Bestandteil, der den Transport von Cholesterin und Triglyzeriden vermittelt, indem er an Rezeptoren wie **LDLR** und **LRP1** bindet und die Clearance sowie Umverteilung von Lipoproteinen koordiniert. ApoE beeinflusst die Lipidhomöostase, den Membranumbau und die rezeptorvermittelte Endozytose und ist damit mit Signalwegen verknüpft, die den zellulären Cholesterin-Export, den Metabolismus von Lipoproteinpartikeln und entzündliche Signalgebung in gewebsständigen Makrophagen und Gliazellen regulieren. Genetische Variation und veränderte Expression von **APOE** sind stark mit einer dysregulierten Lipidverarbeitung und neuroinflammatorischen Prozessen assoziiert, die für Neurodegeneration relevant sind, ebenso wie mit der Biologie atherosklerosebezogener Vorgänge. Entsprechend wird **APOE** häufig in Systemen untersucht, die Lipidtransport, synaptische Aufrechterhaltung und den immun-metabolischen Crosstalk modellieren.
apolipoprotein E/apoE Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des APOE-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von APOE abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die APOE-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit APOE-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.