Plasmide CRISPR d'Activation (h) apolipoprotein E/apoE: sc-400860-ACT

APOE code l’apolipoprotéine E (apoE), une protéine sécrétée se liant aux lipides, qui assure le transport du cholestérol et des triglycérides via des interactions avec des membres de la famille des récepteurs des LDL et avec des protéoglycanes à héparane sulfate. L’apoE joue un rôle central dans l’assemblage et la clairance des particules lipoprotéiques et influence l’absorption cellulaire des lipides, leur redistribution et la signalisation homéostatique dans les hépatocytes, les macrophages et les cellules gliales. Dans le système nerveux, l’apoE module le maintien synaptique, les réponses neuro-inflammatoires et les voies de protéostasie qui affectent la prise en charge de l’amyloïde-β. Les différences génétiques et d’expression d’APOE sont fortement associées aux dyslipidémies et à la neurodégénérescence, ce qui en fait une cible majeure pour des études mécanistiques du métabolisme lipidique et du dialogue immunité–lipides dans le cerveau.

apolipoprotein E/apoE Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de APOE sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

apolipoprotein E/apoE Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus APOE dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription APOE, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de apolipoprotein E/apoE. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus APOE natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de apolipoprotein E/apoE au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie apolipoprotein E/apoE dans les cellules tumorales présentant une expression de APOE silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.