Plasmide Double Nickase (h) Apolipoprotein A I/APOA1: sc-400499-NIC

L'APOA1 humaine code l'apolipoprotéine A‑I, principal composant protéique des particules de lipoprotéines de haute densité (HDL) et médiateur central du transport inverse du cholestérol. APOA1 interagit avec ABCA1 et ABCG1 pour favoriser l'efflux cellulaire du cholestérol et des phospholipides, stimulant la biogenèse des HDL naissantes et soutenant la maturation des HDL dépendante de la lécithine‑cholestérol acyltransférase (LCAT). Par ces processus, APOA1 influence l'homéostasie lipidique, la formation de cellules spumeuses macrophagiques et la signalisation inflammatoire dans des contextes vasculaires et hépatiques. Une expression ou une fonction altérée d'APOA1 est associée à des phénotypes de dyslipidémie et liés à l'athérosclérose, ce qui en fait une cible majeure pour les études mécanistiques du métabolisme des lipoprotéines.

Apolipoprotein A I/APOA1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus APOA1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de APOA1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de APOA1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de APOA1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.