Apolipoprotein A I/APOA1 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-419158-ACT

Il gene murino Apoa1 codifica l’apolipoproteina A-I (APOA1), la principale componente proteica delle lipoproteine ad alta densità (HDL), che promuove l’efflusso di colesterolo e fosfolipidi e sostiene il trasporto inverso del colesterolo. APOA1 agisce insieme a trasportatori lipidici ed enzimi quali ABCA1/ABCG1 e LCAT per favorire la biogenesi delle HDL nascenti, il rimodellamento lipidico e l’omeostasi lipidica sistemica, collegando la secrezione epatica alla rimozione del colesterolo nei tessuti periferici. Attraverso questi processi, l’attività di Apoa1 interseca la biologia delle cellule schiumose dei macrofagi, la segnalazione infiammatoria e le risposte allo stress ossidativo nei tessuti metabolici. L’alterazione dell’espressione di Apoa1/APOA1 è ampiamente utilizzata come readout molecolare negli studi su dislipidemia, suscettibilità all’aterosclerosi e regolazione di tratti cardiometabolici in modelli murini.

Apolipoprotein A I/APOA1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Apoa1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Apolipoprotein A I/APOA1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Apoa1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Apoa1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Apolipoprotein A I/APOA1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Apoa1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Apolipoprotein A I/APOA1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Apolipoprotein A I/APOA1 nelle cellule tumorali con espressione di Apoa1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.