Plasmide CRISPR d'Activation (m) Apolipoprotein A I/APOA1: sc-419158-ACT

Le gène murin Apoa1 code l’apolipoprotéine A‑I (APOA1), principal composant protéique des lipoprotéines de haute densité (HDL), qui favorise l’efflux du cholestérol et des phospholipides et soutient le transport inverse du cholestérol. APOA1 agit en concert avec des transporteurs et des enzymes du métabolisme lipidique tels qu’ABCA1/ABCG1 et la LCAT afin de promouvoir la biogenèse des HDL naissantes, le remodelage lipidique et l’homéostasie lipidique systémique, en reliant la sécrétion hépatique à l’élimination du cholestérol en périphérie. Par ces mécanismes, l’activité d’Apoa1 interfère avec la biologie des macrophages spumeux, la signalisation inflammatoire et les réponses au stress oxydant dans les tissus métaboliques. Les variations d’expression de Apoa1/APOA1 sont largement utilisées comme marqueur moléculaire dans les études portant sur la dyslipidémie, la susceptibilité à l’athérosclérose et la régulation des traits cardiométaboliques dans des modèles murins.

Apolipoprotein A I/APOA1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Apoa1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Apolipoprotein A I/APOA1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Apoa1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Apoa1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Apolipoprotein A I/APOA1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Apoa1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Apolipoprotein A I/APOA1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Apolipoprotein A I/APOA1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Apoa1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.