Plasmide CRISPR d'Activation (h) apoL1: sc-403137-ACT

APOL1 code l’apolipoprotéine L1 (apoL1), une protéine liant les lipides impliquée dans la défense immunitaire innée et les réponses au stress cellulaire. apoL1 est associée aux membranes endosomales et autophagiques et a été reliée à la régulation du trafic vésiculaire, des voies de mort cellulaire programmée et des réseaux de signalisation inductibles par l’interféron. Dans les types cellulaires pertinents pour le rein, l’expression d’APOL1 et l’activité dépendante des variants ont été étudiées dans le contexte de l’homéostasie des podocytes, de la dysfonction mitochondriale et de la signalisation inflammatoire. Une biologie d’APOL1 dérégulée est largement étudiée pour sa contribution aux mécanismes sous-jacents aux phénotypes rénaux protéinuriques et aux modèles de lésions à médiation immune.

apoL1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de APOL1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

apoL1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus APOL1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription APOL1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de apoL1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus APOL1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de apoL1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie apoL1 dans les cellules tumorales présentant une expression de APOL1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.