Plasmide CRISPR d'Activation (h) apoF: sc-407655-ACT

L’APOF humain code l’apolipoprotéine F (apoF), un facteur circulant associé aux lipoprotéines qui module le transport des lipides plasmatiques et le remodelage des lipoprotéines. L’apoF est liée à la biologie des particules HDL et LDL et influence les réactions d’échange lipidique ainsi que la prise en charge des lipoprotéines médiée par les récepteurs, qui façonnent la répartition du cholestérol dans la circulation. À travers ces processus, APOF est étudiée dans le contexte de l’homéostasie lipidique systémique et des mécanismes des maladies cardiométaboliques, notamment les voies de risque associées aux dyslipidémies. Son expression et son impact fonctionnel sont également pertinents dans les modèles du métabolisme lipidique hépatique, où la production et la clairance des lipoprotéines sont des déterminants clés des profils lipidiques.

apoF Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de APOF sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

apoF Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus APOF dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription APOF, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de apoF. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus APOF natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de apoF au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie apoF dans les cellules tumorales présentant une expression de APOF silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.