Plasmide CRISPR/Cas9 KO apoC-IV (m): sc-418944

Présentation

Apoc4 code l’apolipoprotéine C‑IV (apoC‑IV), une apolipoprotéine sécrétée principalement associée aux particules lipoprotéiques circulantes et impliquée dans le transport et le remodelage des lipides. Chez la souris, l’apoC‑IV est liée à la régulation du métabolisme des lipoprotéines riches en triglycérides et s’inscrit à l’interface de voies qui contrôlent l’activité de la lipoprotéine lipase, la gestion hépatique des lipides et les échanges lipidiques entre les fractions VLDL/IDL/HDL. Les variations de la composition en apolipoprotéines peuvent influencer indirectement l’équilibre énergétique systémique et la signalisation inflammatoire via une modification des flux lipidiques et des médiateurs dérivés des lipides. À ce titre, Apoc4 est pertinent pour l’étude des mécanismes de dyslipidémie, des phénotypes cardiométaboliques et de l’homéostasie lipidique centrée sur le foie, dans des contextes physiologiques comme dans des modèles de maladie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO apoC-IV (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Apoc4 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Apoc4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Apoc4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine apoC-IV.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Apoc4 pour l'étude de la signalisation de apoC-IV, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Apoc4 essentiels à la fonction de apoC-IV
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Apoc4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le apoC-IV plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le apoC-IV plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Apoc4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le apoC-IV plasmide HDR (m) et le apoC-IV (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Apoc4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Apoc4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.