Plasmide CRISPR/Cas9 KO apoC-I (m): sc-419163

Présentation

Apoc1 code l’apolipoprotéine C‑I (apoC‑I), une petite apolipoprotéine sécrétée qui s’associe aux particules HDL et VLDL et module le transport des lipides ainsi que le remodelage des lipoprotéines. Chez la souris, l’apoC‑I influence l’équilibre entre la clairance des lipoprotéines riches en triglycérides et le trafic du cholestérol en affectant les interactions avec les récepteurs et les étapes de maturation dépendantes des lipases au sein de la voie circulante des lipoprotéines. L’expression d’Apoc1 est enrichie dans les cellules de la lignée macrophagique et peut façonner des programmes de signalisation de l’immunité innée liés à la gestion des lipides. Une biologie d’APOC1 dérégulée a été associée à une inflammation pertinente pour l’athérosclérose, à des dyslipidémies métaboliques et à des contextes de neuro‑inflammation, ce qui soutient son utilisation dans des études mécanistiques d’immunométabolisme.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO apoC-I (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Apoc1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Apoc1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Apoc1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine apoC-I.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Apoc1 pour l'étude de la signalisation de apoC-I, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Apoc1 essentiels à la fonction de apoC-I
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Apoc1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le apoC-I plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le apoC-I plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Apoc1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le apoC-I plasmide HDR (m) et le apoC-I (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Apoc1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Apoc1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.