APOBEC3F Double Nickaseプラスミド (h): sc-406610-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- APOBEC3F Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- APOBEC3Fダブルニカースプラスミド（h）およびAPOBEC3Fダブルニカースプラスミド（h2）は、APOBEC3Fを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
APOBEC3F Double Nickaseプラスミド (h) | sc-406610-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
APOBEC3F Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-406610-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ヒトAPOBEC3Fは、亜鉛依存性のシチジン脱アミノ化酵素をコードしており、一本鎖DNA上のシチジンをウリジンへと変換することで編集を行い、変異を導入してレトロウイルスおよび内在性レトロエレメントの複製を制限します。APOBEC3ファミリーの一員として、APOBEC3Fは、ウイルス複製中間体、DNA損傷シグナル伝達、ゲノム監視と交差する内因性免疫経路に関与します。その活性は、HIV-1 Vifのようなウイルス側アンタゴニストとの相互作用によって調節されており、APOBEC3Fの生物学は宿主―病原体間の軍拡競争やウイルスの免疫回避機構と結び付いています。さらに、APOBEC酵素による脱アミノ化が制御不全または誤標的化すると、ゲノム不安定性に寄与し得る変異過程と関連することも示されており、APOBEC3Fは変異シグネチャーや炎症性微小環境に関する研究においても重要な因子となります。
APOBEC3F ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における APOBEC3F 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、APOBEC3F内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、APOBEC3Fの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、APOBEC3Fが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。