Particules Lentivirales d'Activation (h) APOBEC3B: sc-401700-LAC

APOBEC3B (enzyme d’édition de l’ARNm de l’apolipoprotéine B, sous-unité catalytique 3B) est une cytidine désaminase qui convertit la cytosine en uracile dans l’ADN simple brin, contribuant à la restriction antivirale innée et au contrôle des rétroéléments endogènes. Son activité s’articule avec les processus de réplication et de réparation de l’ADN en générant des lésions pouvant être transformées en mutations, influençant ainsi la stabilité génomique. Une expression dérégulée d’APOBEC3B a été associée à des signatures mutationnelles caractéristiques observées dans de nombreux types de cancers et est étudiée dans le contexte de l’évolution tumorale, des réponses aux dommages de l’ADN et du stress réplicatif. En tant que membre nucléaire de la famille APOBEC, APOBEC3B est largement utilisé pour étudier les mécanismes de mutagenèse, les interactions hôte–virus et les déterminants de phénotypes induits par les mutations dans les cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales APOBEC3B (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de APOBEC3B dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales APOBEC3B (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription APOBEC3B, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de APOBEC3B. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif APOBEC3B ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.