Plasmide CRISPR d'Activation (h) APOBEC3B: sc-401700-ACT

APOBEC3B code une cytidine désaminase qui édite l’ADN simple brin en convertissant la cytosine en uracile, jouant un rôle dans la défense antivirale intrinsèque et la restriction des rétroéléments. Son activité s’articule avec les processus de réplication et de réparation de l’ADN, notamment les réponses au stress réplicatif et le traitement de lésions mutagènes, façonnant ainsi les profils de mutations à l’échelle du génome. Une expression dérégulée d’APOBEC3B est associée à une augmentation de la charge mutationnelle somatique et à des signatures mutationnelles APOBEC caractéristiques dans de nombreux types de tumeurs. Par conséquent, APOBEC3B est largement étudiée dans les voies qui contrôlent la stabilité du génome, la signalisation de l’immunité innée et l’adaptation pilotée par les mutations.

APOBEC3B Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de APOBEC3B sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

APOBEC3B Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus APOBEC3B dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription APOBEC3B, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de APOBEC3B. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus APOBEC3B natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de APOBEC3B au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie APOBEC3B dans les cellules tumorales présentant une expression de APOBEC3B silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.