Plásmido Doble Nickase (h) apoB: sc-400705-NIC

APOB codifica la apolipoproteína B (apoB), un componente estructural esencial de las lipoproteínas aterogénicas que sirve de andamiaje para el ensamblaje de lipoproteínas de muy baja densidad (VLDL) en los hepatocitos y se procesa a apoB-100 para su circulación. La apoB coordina la lipidación y la secreción de partículas ricas en triglicéridos y colesterol mediante vías en las que participan la proteína microsomal de transferencia de triglicéridos (MTP) y el programa secretor del retículo endoplásmico. En los tejidos periféricos, las lipoproteínas que contienen apoB son fundamentales para la captación mediada por el receptor de LDL, acoplando el transporte de lípidos a la homeostasis del colesterol celular y a la señalización posterior. La alteración de la expresión de APOB o de la producción de partículas de apoB se asocia con dislipidemia y patología vascular impulsada por lípidos, lo que la convierte en un objetivo central para estudios mecanísticos del metabolismo de las lipoproteínas.

apoB El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus APOB en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de APOB. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de APOB. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con APOB alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.