Plasmide CRISPR/Cas9 KO APLP2 (h): sc-406400

Présentation

APLP2 (amyloid beta precursor-like protein 2) est une glycoprotéine transmembranaire de type I de la famille APP, qui subit un clivage protéolytique et participe au trafic des protéines membranaires, à l’adhérence cellulaire et à la signalisation cellule–cellule. Elle se localise dans des compartiments sécrétoires et endocytiques et a été associée à la régulation de l’endocytose, à des processus du développement synaptique et neuronal, ainsi qu’aux voies de la protéostasie. APLP2 peut moduler les interactions avec des composants de la matrice extracellulaire et des protéines adaptatrices intracellulaires, influençant l’organisation du cytosquelette et le renouvellement des récepteurs. Les altérations de la biologie de la famille APP, notamment l’expression et le processing d’APLP2, sont étudiées dans des contextes tels que la neurobiologie et les phénotypes des cellules cancéreuses, où des changements d’adhérence, de migration et de signalisation de survie sont pertinents.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO APLP2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène APLP2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du APLP2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert APLP2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine APLP2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en APLP2 pour l'étude de la signalisation de APLP2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de APLP2 essentiels à la fonction de APLP2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de APLP2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le APLP2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le APLP2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus APLP2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le APLP2 plasmide HDR (h) et le APLP2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie APLP2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles APLP2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.