Plásmido Doble Nickase (h) APLNR: sc-402374-NIC

APLNR codifica el receptor de apelina, un receptor acoplado a proteína G de clase A que se une a los péptidos apelina y Elabela/Toddler para regular el desarrollo cardiovascular, la angiogénesis y la homeostasis de los líquidos tisulares. Tras la unión del ligando, APLNR se acopla predominantemente a la señalización dependiente de Gαi y de β-arrestina, modulando vías como PI3K–AKT, MAPK/ERK y la señalización de óxido nítrico, que influyen en la función endotelial y la migración celular. La desregulación de la señalización de APLNR se ha implicado en la biología cardiometabólica y vascular, incluido el remodelado asociado a insuficiencia cardíaca, la hipertensión pulmonar y la angiogénesis asociada a tumores, lo que lo convierte en un nodo útil para estudiar la señalización del microambiente. En modelos celulares, la perturbación de APLNR permite estudios mecanísticos de la dinámica ligando-receptor, la desensibilización/internalización del receptor y las respuestas transcripcionales aguas abajo.

APLNR El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus APLNR en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de APLNR. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de APLNR. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con APLNR alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.