Plasmide Double Nickase (m) APG5/ATG5: sc-419149-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) APG5/ATG5 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide APG5/ATG5 Double Nickase (m) et le plasmide APG5/ATG5 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Atg5. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: APG5/ATG5 Antibody (C-1): sc-133158
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) APG5/ATG5 | sc-419149-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) APG5/ATG5 | sc-419149-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Atg5 chez la souris code APG5/ATG5, un facteur clé de l’autophagie indispensable à la biogenèse des autophagosomes via le système de conjugaison ATG12–ATG5–ATG16L1, qui soutient la lipidation de LC3 et l’allongement du phagophore. En coordonnant la macroautophagie, ATG5 influence le contrôle qualité du cytoplasme, l’homéostasie mitochondriale et l’adaptation au stress, avec des effets en aval sur la signalisation de l’immunité innée et le niveau basal d’inflammation. Une autophagie dépendante d’ATG5 altérée a été associée, dans des modèles expérimentaux, à une protéostasie dérégulée liée à la neurodégénérescence, à une susceptibilité accrue aux infections, à des dysfonctionnements métaboliques et à la biologie tumorale. La perturbation d’Atg5 est donc largement utilisée pour disséquer les mécanismes dépendants de l’autophagie de ceux indépendants de l’autophagie, dans des processus tels que la survie cellulaire, la différenciation et les voies immunitaires.
APG5/ATG5 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Atg5 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Atg5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Atg5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Atg5.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.