Plasmide Double Nickase (h) Apg-1: sc-403942-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Apg-1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Apg-1 Double Nickase (h) et le plasmide Apg-1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant HSPA4L. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Apg-1 Antibody (D-12): sc-133253
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Apg-1 | sc-403942-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Apg-1 | sc-403942-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HSPA4L code pour Apg-1, un membre de la famille HSP70 qui agit comme chaperon moléculaire ATP‑dépendant, soutenant la protéostasie en conditions basales comme en situation de stress. Apg-1 participe au repliement des protéines, à la prévention de l’agrégation et au contrôle qualité en coordination avec des co‑chaperons, ce qui le relie aux réponses cellulaires au stress et au maintien de l’homéostasie protéique. Par ses fonctions liées à la gestion des protéines mal repliées et au stress protéotoxique, HSPA4L est pertinent pour des voies impliquées dans la survie cellulaire, la différenciation et l’adaptation aux agressions environnementales. Une dérégulation des réseaux de chaperons incluant Apg-1 a été associée à une tolérance au stress modifiée et à des phénotypes de mauvais repliement protéique étudiés en biologie du cancer, dans des modèles de neurodégénérescence, ainsi que dans des contextes reproductifs et développementaux.
Apg-1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HSPA4L dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HSPA4L. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HSPA4L. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HSPA4L.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.