Apelin Plasmide Double Nickase (h): sc-401548-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Apelin Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Apelin Double Nickase Plasmid (h) e il Apelin Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira APLN. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Apelin Antibody (2A1-2D5): sc-293441
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Apelin Plasmide Double Nickase (h) | sc-401548-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Apelin Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401548-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
L’APLN umano codifica l’apelina, un ligando peptidico secreto per il recettore accoppiato a proteina G APJ/APLNR, che regola il tono vascolare, la segnalazione angiogenica, la contrattilità cardiaca e l’omeostasi dei fluidi. L’interazione apelin–APJ attiva vie a valle che includono PI3K/AKT, ERK/MAPK e la segnalazione eNOS/NO, modulando la migrazione delle cellule endoteliali, la reattività della muscolatura liscia e il crosstalk metabolico nel tessuto adiposo e nel muscolo scheletrico. Una segnalazione dell’apelina deregolata è stata associata al rimodellamento cardiovascolare, alle patologie vascolari polmonari e alla disfunzione metabolica, rendendo APLN un nodo utile per studiare la comunicazione peptide–GPCR in condizioni di stress e infiammazione. In biologia tumorale, l’apelina può influenzare programmi di adattamento all’ipossia e la dinamica della nicchia vascolare, supportando studi meccanicistici della segnalazione del microambiente senza implicare un beneficio clinico.
Apelin Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus APLN nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di APLN. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di APLN. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con APLN interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.