Plásmido Doble Nickase (h) AP4A Hydrolase: sc-407028-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)AP4A Hydrolase consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa AP4A Hydrolase (h) y el plásmido de doble nickasa AP4A Hydrolase (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a NUDT2. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: AP4A Hydrolase Anticuerpo (F-5): sc-271410
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) AP4A Hydrolase | sc-407028-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) AP4A Hydrolase | sc-407028-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
NUDT2 codifica la hidrolasa humana de Ap4A, una enzima de la familia Nudix que hidroliza el tetrafosfato de diadenosina (Ap4A) y otros polifosfatos de dinucleósidos relacionados para regular la señalización intracelular de “alarmonas”. Al controlar el recambio de Ap4A, NUDT2 influye en la homeostasis de nucleótidos y en vías sensibles al estrés que afectan programas de transcripción, el metabolismo del ARN y la progresión del ciclo celular. En la literatura, la alteración de la actividad de NUDT2 se ha vinculado a cambios en la capacidad proliferativa, las respuestas al daño del ADN y las redes de señalización inflamatoria, por lo que resulta relevante para estudiar la remodelación dependiente del contexto de las cascadas de señalización en células humanas. Dado que los niveles de Ap4A pueden modular interacciones proteína–nucleótido y la señalización posterior mediada por quinasas/adaptadores, la perturbación de NUDT2 es útil para desentrañar el control de las transiciones de estado celular mediado por nucleótidos.
AP4A Hydrolase El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus NUDT2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de NUDT2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de NUDT2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con NUDT2 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.