AOX1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403997-ACT

O AOX1 humano codifica a aldeído oxidase 1, uma enzima citosólica dependente de molibdénio que catalisa a oxidação de diversos aldeídos e compostos N-heterocíclicos durante a fase I do metabolismo de xenobióticos. O AOX1 participa na homeostase redox e interage com redes metabólicas mais amplas ao gerar espécies reativas de oxigénio como subprodutos e ao contribuir para a depuração de aldeídos endógenos produzidos durante a peroxidação lipídica. Variações na expressão ou na atividade de AOX1 podem alterar a sensibilidade celular ao stress oxidativo e influenciar fenótipos metabólicos, tornando-o relevante para estudos da função hepática e da capacidade de desintoxicação. A disfunção no processamento de aldeídos tem sido associada a processos inflamatórios e fibróticos, sustentando a investigação do AOX1 como modificador em modelos de lesão metabólica e oxidativa.

AOX1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de AOX1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

AOX1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus AOX1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição AOX1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de AOX1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus AOX1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de AOX1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via AOX1 em células tumorais com expressão de AOX1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.