Antiquitin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-417902

Descripción general

ALDH7A1 codifica antiquitina, una deshidrogenasa de aldehídos dependiente de NAD+ que participa en el catabolismo de la lisina al oxidar el semialdehído de α-aminoadípico y otros aldehídos reactivos relacionados. Mediante la detoxificación de intermediarios aldehídicos, la antiquitina contribuye a la homeostasis redox celular y limita la acumulación de metabolitos electrófilos que pueden alterar las vías metabólicas y de respuesta al estrés. Las variantes con pérdida de función se asocian a la epilepsia dependiente de piridoxina, lo que refleja la alteración de la degradación de la lisina y efectos secundarios sobre la disponibilidad de vitamina B6/PLP y el metabolismo de neurotransmisores. Por ello, ALDH7A1 es una diana útil para estudiar el acoplamiento metabólico mitocondria–citosol, la biología del estrés por aldehídos y los errores congénitos del metabolismo en modelos celulares humanos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Antiquitin (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen ALDH7A1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del ALDH7A1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de ALDH7A1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Antiquitin.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en ALDH7A1 para la investigación de la señalización de Antiquitin, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de ALDH7A1 críticos para la función de Antiquitin
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de ALDH7A1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Antiquitin CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Antiquitin CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus ALDH7A1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Antiquitin (h) y el plásmido HDR Antiquitin (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología ALDH7A1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana ALDH7A1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.