Plasmide Double Nickase (h) ANT2: sc-400680-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) ANT2 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide ANT2 Double Nickase (h) et le plasmide ANT2 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant SLC25A5. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: ANT2 Antibody (F-7): sc-518109
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) ANT2 | sc-400680-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) ANT2 | sc-400680-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SLC25A5 code l’adénine nucléotide translocase 2 (ANT2), un transporteur ADP/ATP de la membrane interne mitochondriale qui échange l’ADP cytosolique contre l’ATP de la matrice, couplant ainsi la phosphorylation oxydative à la demande énergétique cellulaire. ANT2 contribue au transport des métabolites mitochondriaux, à la régulation du potentiel de membrane et à l’intégration des signaux bioénergétiques avec les réponses au stress, avec notamment des liens vers la transition de perméabilité et des voies associées à l’apoptose. Son expression est souvent associée à des états prolifératifs et à un métabolisme reprogrammé, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la dysfonction mitochondriale, des altérations du métabolisme énergétique et des changements liés aux maladies dans les programmes de survie cellulaire. L’étude d’ANT2 aide à préciser comment l’échange des nucléotides influence l’homéostasie mitochondriale, l’équilibre rédox et les réseaux de signalisation de la croissance.
ANT2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus SLC25A5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de SLC25A5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de SLC25A5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de SLC25A5.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.