Plasmide Double Nickase (m) ANT1: sc-419112-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) ANT1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide ANT1 Double Nickase (m) et le plasmide ANT1 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Slc25a4. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) ANT1 | sc-419112-NIC | 20 µg | $410.00 |
Slc25a4 code pour la translocase des nucléotides adényliques 1 (ANT1), un transporteur ADP/ATP de la membrane interne mitochondriale qui échange l’ADP cytosolique contre l’ATP matriciel afin de soutenir la phosphorylation oxydative et l’homéostasie énergétique cellulaire. ANT1 est étroitement liée à l’activité de la chaîne respiratoire, au potentiel de membrane mitochondriale et à la régulation de processus associés à la transition de perméabilité, lesquels influencent l’apoptose et les réponses au stress dans les tissus à forte demande énergétique. Chez la souris, Slc25a4 est fréquemment étudié dans le cadre de la bioénergétique mitochondriale, du métabolisme des fibres musculaires et du dialogue inter-organellaire qui façonne l’équilibre rédox. Des altérations de la fonction d’ANT1 ont été associées à des phénotypes de dysfonction mitochondriale pertinents pour des modèles de recherche neuromusculaire et cardiométabolique.
ANT1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Slc25a4 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Slc25a4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Slc25a4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Slc25a4.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.