ANP32D CRISPR Activationプラスミド (h): sc-410569-ACT

ANP32D（acidic nuclear phosphoprotein 32 family member D）は、ANP32ファミリーに属するヒトの核内タンパク質で、クロマチン関連の遺伝子発現制御やRNAに関わるプロセスへの関与が示唆されています。ANP32タンパク質は、ロイシンリッチリピートと、タンパク質間相互作用に影響しうる酸性のC末端領域を特徴とし、転写制御、核‐細胞質間ダイナミクス、細胞ストレス応答に関与する相互作用を調節すると考えられています。これらの機能を通じて、ANP32Dは増殖やアポトーシスを司る経路とも関連し、エピジェネティック制御や転写プログラムが破綻する状況において、その発現変動が検討されてきました。ANP32Dを研究することは、核内リン酸化タンパク質ネットワークが細胞状態の遷移や疾患関連の遺伝子制御回路をどのように形成するかの理解に役立ちます。

ANP32D CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ANP32Dの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ANP32D CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ANP32D 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はANP32D転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ANP32Dの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のANP32D遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるANP32D依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびANP32D発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるANP32D経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。