ANP32D CRISPR Activation Plasmid (h): sc-410569-ACT

ANP32D (acidisches nukleäres Phosphoprotein 32, Familienmitglied D) ist ein menschliches Kernprotein aus der ANP32-Familie, das an der chromatinassoziierten Regulation der Genexpression sowie an RNA-bezogenen Prozessen beteiligt ist. ANP32-Proteine zeichnen sich durch leucinreiche Wiederholungen (Leucine-rich repeats) und eine saure C-terminale Region aus, die Protein-Protein-Interaktionen beeinflussen kann, welche an der Transkriptionskontrolle, der nukleozytoplasmatischen Dynamik und zellulären Stressantworten beteiligt sind. Über diese Funktionen ist ANP32D für Signalwege relevant, die Proliferation und Apoptose steuern, und seine veränderte Expression wurde in Kontexten untersucht, in denen epigenetische und transkriptionelle Programme gestört sind. Die Erforschung von ANP32D hilft zu klären, wie Netzwerke nukleärer Phosphoproteine Zellzustandsübergänge und krankheitsassoziierte genregulatorische Schaltkreise formen.

ANP32D Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ANP32D-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ANP32D Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ANP32D-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ANP32D-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ANP32D-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ANP32D-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ANP32D-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ANP32D-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ANP32D-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.