Partículas Lentivirales de Activación (m2) ANP32A: sc-419111-LAC-2

El gen Anp32a del ratón codifica ANP32A, una fosfoproteína nuclear ácida conservada que actúa como chaperona de histonas y moduladora de la organización de la cromatina, influyendo en la regulación transcripcional y la progresión del ciclo celular. ANP32A participa en procesos nucleares, incluido el procesamiento de ARNm y la señalización asociada a la proteína fosfatasa 2A (PP2A), y se ha implicado en el control de la apoptosis y las respuestas al estrés celular mediante interacciones con complejos proteicos reguladores. La alteración de la actividad de ANP32A se ha vinculado a fenotipos relevantes para la neurodegeneración, la biología tumoral y la señalización inflamatoria, lo que la convierte en un locus útil para estudiar relaciones genotipo–fenotipo en modelos murinos. La edición génica de Anp32a facilita la investigación mecanística de la regulación epigenética, las redes de señalización nuclear y las vías relevantes para enfermedades en células primarias y en sistemas in vivo.

Las partículas de activación lentiviral ANP32A (m2) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Anp32a en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral ANP32A (m2) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Anp32a, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de ANP32A. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Anp32a y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.