Plasmide CRISPR d'Activation (h) Annexin VII: sc-402823-ACT

ANXA7 code l’annexine VII, une protéine de liaison aux phospholipides dépendante du Ca2+ qui s’associe aux membranes cellulaires et participe à la fusion membranaire, au trafic vésiculaire et à l’exocytose régulée. L’annexine VII contribue à la dynamique de signalisation du Ca2+ et à l’organisation du cytosquelette, influençant des processus tels que la libération de granules et la réparation membranaire dans les cellules sécrétoires et excitables. Des rôles rapportés relient ANXA7 au contrôle de la croissance cellulaire et à la signalisation en réponse au stress, et une expression altérée a été observée dans de multiples contextes pathologiques, notamment le cancer et les troubles neurologiques. Ces propriétés font d’ANXA7 une cible utile pour disséquer le remodelage membranaire régulé par le Ca2+ et les voies liées à la sécrétion.

Annexin VII Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ANXA7 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Annexin VII Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ANXA7 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ANXA7, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Annexin VII. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ANXA7 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Annexin VII au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Annexin VII dans les cellules tumorales présentant une expression de ANXA7 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.