Plasmide CRISPR d'Activation (h) Ankyrin G: sc-400421-ACT

Le gène humain **ANK3** code l’ankyrine G, un adaptateur multifonctionnel qui relie les protéines membranaires intégrales au cytosquelette spectrine–actine, organisant des domaines membranaires spécialisés et stabilisant des complexes protéiques. L’ankyrine G est essentielle à la polarité et à l’excitabilité neuronales grâce à son rôle dans l’agrégation des canaux sodiques voltage-dépendants et d’autres composants au segment initial de l’axone et aux nœuds de Ranvier, et elle contribue également à l’organisation des membranes épithéliales. Par ces fonctions d’échafaudage, l’ankyrine G influence le remodelage du cytosquelette, le trafic membranaire et les voies de transduction du signal qui coordonnent l’architecture et la communication cellulaires. Des études génétiques et d’expression ont associé une dérégulation d’**ANK3** à des phénotypes neuropsychiatriques et neurodéveloppementaux, ce qui étaye sa pertinence pour la recherche mécanistique sur les circuits neuronaux et la biologie des domaines membranaires.

Ankyrin G Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ANK3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Ankyrin G Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ANK3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ANK3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Ankyrin G. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ANK3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Ankyrin G au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Ankyrin G dans les cellules tumorales présentant une expression de ANK3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.