Plásmido Doble Nickase (m) ANKTM1: sc-435491-NIC

El gen *Trpa1* de ratón codifica ANKTM1 (TRPA1), un canal catiónico no selectivo y polimodal de la familia de receptores potenciales transitorios (TRP) que integra irritantes electrófilos, especies reactivas de oxígeno/nitrógeno y mediadores inflamatorios para regular la excitabilidad de las neuronas sensoriales. La activación del canal impulsa la entrada de calcio y la señalización downstream, lo que modula la nocicepción, la inflamación neurógena y las respuestas de las vías respiratorias y vasculares, vinculando a TRPA1 con procesos como la detección del estrés oxidativo y la compuerta del canal iónico modulada por GPCR y quinasas. La actividad de TRPA1 se cruza con vías inflamatorias a través de la liberación de mediadores y el diálogo cruzado neurona–inmunidad, influyendo en la hipersensibilidad al dolor y en fenotipos de prurito en modelos preclínicos. La desregulación de la señalización de TRPA1 se ha asociado con estados de dolor inflamatorio, mecanismos de dolor neuropático, tos e hiperreactividad de las vías respiratorias tipo asma y el procesamiento sensorial relacionado con la migraña, lo que respalda su amplia relevancia en la investigación en neurobiología e inmunofisiología.

ANKTM1 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Trpa1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Trpa1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Trpa1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Trpa1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.