Plasmide CRISPR d'Activation (m) ANKTM1: sc-435491-ACT

Le gène murin *Trpa1* code ANKTM1 (TRPA1), un canal cationique non sélectif de la famille des récepteurs potentiels transitoires, enrichi dans les neurones sensoriels et d’autres types cellulaires qui détectent les irritants chimiques, le stress oxydant et des signaux liés à la température. L’ouverture du canal favorise l’influx de Ca2+, ce qui se couple à l’inflammation neurogène et à la signalisation liée à la douleur via des voies dépendantes du calcium, des cascades MAPK et des programmes transcriptionnels en aval. L’activité d’ANKTM1 s’intègre à la détection des électrophiles réactifs et à des processus régulés par l’état rédox, influençant les réponses cellulaires aux lésions tissulaires et aux médiateurs inflammatoires. Des altérations de la signalisation de TRPA1 ont été associées à des modèles de douleur neuropathique, de prurit, d’irritation des voies respiratoires et d’hypersensibilité inflammatoire, ce qui en fait un nœud utile pour des études mécanistiques des circuits somatosensoriels et inflammatoires.

ANKTM1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Trpa1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ANKTM1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Trpa1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Trpa1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ANKTM1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Trpa1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ANKTM1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ANKTM1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Trpa1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.