Plasmide CRISPR d'Activation (m) ANKRD9: sc-428809-ACT

Le gène murin Ankrd9 code ANKRD9, une protéine contenant des répétitions ankyrine impliquée dans des réseaux d’interactions protéine–protéine qui façonnent la signalisation intracellulaire et la régulation de l’état cellulaire. Bien que la fonction moléculaire d’ANKRD9 reste imparfaitement caractérisée, les protéines à répétitions ankyrine modulent fréquemment des activités d’adaptateurs/échafaudages, influençant des voies liées à l’organisation du cytosquelette, au trafic vésiculaire et aux réponses transcriptionnelles à des signaux métaboliques et de stress. L’expression d’Ankrd9 a été étudiée dans des contextes pertinents pour l’homéostasie tissulaire et la différenciation, où des modifications des réseaux de régulation peuvent contribuer à des phénotypes associés à l’inflammation, au déséquilibre métabolique et à une dérégulation des programmes de croissance. Par conséquent, Ankrd9 constitue un nœud utile pour explorer la connectivité des voies et le remodelage des réseaux géniques dans des systèmes modèles cellulaires murins et in vivo.

ANKRD9 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Ankrd9 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ANKRD9 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Ankrd9 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Ankrd9, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ANKRD9. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Ankrd9 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ANKRD9 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ANKRD9 dans les cellules tumorales présentant une expression de Ankrd9 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.