ANKRD9 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-428809-ACT

Das Mausgen *Ankrd9* kodiert ANKRD9, ein Ankyrin-Repeat-haltiges Protein, das an Protein-Protein-Interaktionsnetzwerken beteiligt ist, welche die intrazelluläre Signalübertragung und die Regulation von Zellzuständen prägen. Obwohl die molekulare Funktion von ANKRD9 bislang nicht vollständig charakterisiert ist, modulieren Ankyrin-Repeat-Proteine häufig Adapter- bzw. Scaffold-Funktionen und beeinflussen damit Signalwege, die mit der Organisation des Zytoskeletts, vesikulärem Transport sowie transkriptionellen Antworten auf metabolische und Stressreize verknüpft sind. Die Expression von *Ankrd9* wurde in Kontexten untersucht, die für Gewebehomöostase und Differenzierung relevant sind, wobei Verschiebungen in regulatorischen Netzwerken zu Phänotypen beitragen können, die mit Entzündung, metabolischem Ungleichgewicht und fehlregulierten Wachstumsprogrammen assoziiert sind. Damit dient *Ankrd9* als nützlicher Knotenpunkt, um die Konnektivität von Signalwegen und das Remodeling von Gen-Netzwerken in Maus-Zellkultur- und In-vivo-Modellsystemen zu untersuchen.

ANKRD9 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Ankrd9-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ANKRD9 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Ankrd9-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Ankrd9-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ANKRD9-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Ankrd9-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ANKRD9-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ANKRD9-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Ankrd9-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.