Plasmide CRISPR d'Activation (h) ANKRD50: sc-412772-ACT

Le gène humain **ANKRD50** code une protéine contenant des répétitions ankyrine, impliquée dans le trafic endosomal et le tri des protéines membranaires, contribuant au contrôle spatial des récepteurs de signalisation et des transporteurs. Les fonctions rapportées associent ANKRD50 à des réseaux de régulation liés aux endosomes qui influencent le recyclage des récepteurs, la dynamique vésiculaire et l’ajustement fin des voies en aval, notamment des processus modulant les réponses de signalisation aux facteurs de croissance et du système immunitaire. Par ces rôles, ANKRD50 présente un intérêt pour l’étude de l’homéostasie cellulaire, de la protéostasie et de la fidélité de la transduction du signal dans des contextes différenciés comme prolifératifs. Les altérations du trafic endomembranaire étant une caractéristique commune à de nombreux mécanismes pathologiques, ANKRD50 constitue une cible utile pour analyser comment des perturbations du trafic remodèlent les états de signalisation cellulaire.

ANKRD50 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ANKRD50 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ANKRD50 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ANKRD50 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ANKRD50, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ANKRD50. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ANKRD50 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ANKRD50 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ANKRD50 dans les cellules tumorales présentant une expression de ANKRD50 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.