Plasmide Double Nickase (h) ANKRD5: sc-408943-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) ANKRD5 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide ANKRD5 Double Nickase (h) et le plasmide ANKRD5 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ANKEF1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) ANKRD5 | sc-408943-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) ANKRD5 | sc-408943-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ANKEF1 code une protéine contenant des répétitions ankyrine, rattachée à la nomenclature ANKRD5, une architecture de domaines couramment associée aux interactions protéine–protéine qui organisent des complexes multiprotéiques dans le cytoplasme et le noyau. Bien que ANKEF1/ANKRD5 reste imparfaitement caractérisé, les protéines à répétitions ankyrine modulent fréquemment la transduction du signal, l’organisation du cytosquelette et le renouvellement dépendant de l’ubiquitine en agissant comme échafaudages (scaffolds) ou adaptateurs. Des études d’expression et de génétique ont impliqué ce locus dans des programmes régulateurs influençant l’état cellulaire et les réponses au stress, ce qui le rend pertinent pour des investigations mécanistiques du câblage des voies de signalisation dans les cellules humaines. Des travaux en cours explorent d’éventuelles associations avec des phénotypes liés aux maladies via une connectivité de réseau altérée plutôt que par une activité enzymatique unique et clairement définie.
ANKRD5 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ANKEF1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ANKEF1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ANKEF1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ANKEF1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.