Plasmide CRISPR/Cas9 KO ANKRD22 (m): sc-424577

Présentation

Ankrd22 code ANKRD22, une protéine contenant des répétitions ankyrine impliquée dans les interactions protéine–protéine susceptibles d’influencer la signalisation cellulaire et les programmes d’adaptation au stress. Des études de profilage de l’expression ont associé ANKRD22 à l’état métabolique et à une régulation spécifique des tissus, suggérant un rôle dans des voies qui coordonnent l’équilibre énergétique avec des signaux de croissance et de survie. Dans les systèmes mammifères, les protéines à répétitions ankyrine interagissent fréquemment avec les mécanismes de renouvellement dépendants de l’ubiquitine, l’organisation du cytosquelette et le contrôle transcriptionnel, ce qui fait d’Ankrd22 une cible pertinente pour analyser des réseaux régulateurs dépendants du contexte. Des modifications de l’expression d’ANKRD22 ont été rapportées dans des jeux de données associés à des maladies, ce qui appuie son utilisation comme nœud moléculaire pour des études mécanistiques de la dérégulation du métabolisme et de la signalisation proliférative in vivo et dans des modèles cellulaires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ANKRD22 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ankrd22 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ankrd22, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ankrd22 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ANKRD22.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ankrd22 pour l'étude de la signalisation de ANKRD22, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Ankrd22 essentiels à la fonction de ANKRD22
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ankrd22 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ANKRD22 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le ANKRD22 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ankrd22. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ANKRD22 plasmide HDR (m) et le ANKRD22 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ankrd22 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ankrd22 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.