Plasmide CRISPR d'Activation (h) ANKRD22: sc-416874-ACT

ANKRD22 (protéine 22 contenant un domaine à répétitions ankyrine) est une protéine humaine à répétitions ankyrine impliquée dans des réseaux d’interactions protéine–protéine qui façonnent la signalisation cellulaire et la régulation transcriptionnelle. Bien que ses rôles mécanistiques ne soient pas encore entièrement définis, l’expression d’ANKRD22 a été associée, selon le contexte, à des modifications de la prolifération cellulaire, de l’adaptation métabolique et des programmes de réponse au stress. Des études transcriptomiques rapportent des niveaux d’ANKRD22 altérés dans de multiples types de cancers, ce qui soutient l’exploration de sa contribution à la signalisation oncogénique, à l’adaptation au microenvironnement tumoral et à des phénotypes associés à des biomarqueurs. En tant que nœud régulateur potentiel, ANKRD22 présente un intérêt pour disséquer les interactions entre voies de signalisation affectant le contrôle de la croissance et l’homéostasie cellulaire.

ANKRD22 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ANKRD22 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ANKRD22 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ANKRD22 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ANKRD22, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ANKRD22. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ANKRD22 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ANKRD22 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ANKRD22 dans les cellules tumorales présentant une expression de ANKRD22 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.