Plasmide CRISPR d'Activation (h) Anillin: sc-403342-ACT

ANLN code l’anilline, une protéine d’échafaudage conservée se liant à la F-actine et à la myosine II, qui coordonne l’assemblage de l’anneau contractile, l’ingression du sillon de clivage et l’achèvement de la cytocinèse. L’anilline intègre les signaux issus de la dynamique actomyosine régulée par RhoA/ROCK avec l’organisation des septines et le remodelage membrane–cytosquelette afin d’assurer une ségrégation chromosomique et une division cellulaire fidèles. Une expression dérégulée d’ANLN est associée à une prolifération aberrante, à une instabilité génomique et à une altération du contrôle du cycle cellulaire, ce qui en fait un marqueur largement utilisé dans les études de biologie tumorale et de fidélité mitotique. En tant qu’organisateur du cytosquelette, l’anilline soutient également les recherches sur la tension corticale, l’arrondissement cellulaire et l’architecture des tissus épithéliaux.

Anillin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ANLN sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Anillin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ANLN dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ANLN, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Anillin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ANLN natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Anillin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Anillin dans les cellules tumorales présentant une expression de ANLN silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.