Angptl3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402932-ACT

ANGPTL3 codifica l’angiopoietina-like 3, una glicoproteina secreta prodotta prevalentemente dagli epatociti che regola l’omeostasi sistemica dei lipidi e dell’energia. Angptl3 inibisce la lipoproteina lipasi e la lipasi endoteliale, modulando il processamento delle lipoproteine ricche di trigliceridi e il rimodellamento delle HDL, e si integra con reti di segnalazione metabolica che influenzano il flusso degli acidi grassi e la clearance delle lipoproteine. Un’alterata attività di ANGPTL3 è associata a fenotipi di dislipidemia e al rischio cardiometabolico, rendendolo un nodo chiave per lo studio dei programmi di secrezione epatica e della gestione dei lipidi nei tessuti periferici. In quanto fattore circolante, Angptl3 offre anche un readout facilmente misurabile per collegare la regolazione trascrizionale a cambiamenti quantificabili nelle vie del metabolismo lipidico.

Angptl3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ANGPTL3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Angptl3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ANGPTL3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ANGPTL3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Angptl3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ANGPTL3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Angptl3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Angptl3 nelle cellule tumorali con espressione di ANGPTL3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.