Angptl3 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402932-ACT

ANGPTL3 kodiert Angiopoietin-like 3, ein sezerniertes Glykoprotein, das überwiegend von Hepatozyten produziert wird und die systemische Lipid- und Energiehomöostase reguliert. Angptl3 hemmt die Lipoproteinlipase und die endotheliale Lipase, moduliert damit die Verarbeitung triglyceridreicher Lipoproteine sowie das HDL-Remodeling und ist in metabolische Signalnetzwerke eingebunden, die den Fettsäurefluss und die Lipoprotein-Clearance beeinflussen. Eine veränderte ANGPTL3-Aktivität ist mit Dyslipidämie-Phänotypen und kardiometabolischem Risiko assoziiert und macht das Gen zu einem zentralen Knotenpunkt für die Untersuchung hepatischer Sekretionsprogramme und der Lipidverarbeitung in peripheren Geweben. Als zirkulierender Faktor liefert Angptl3 zudem einen gut messbaren Readout, um transkriptionelle Regulation mit nachweisbaren Veränderungen in Lipidstoffwechselwegen zu verknüpfen.

Angptl3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ANGPTL3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Angptl3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ANGPTL3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ANGPTL3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Angptl3-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ANGPTL3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Angptl3-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Angptl3-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ANGPTL3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.