Plasmide Double Nickase (h) Angiotensinogen: sc-401013-NIC

L'AGT humain code l'angiotensinogène, le précurseur des peptides de l'angiotensine produit par le foie, qui alimente le système rénine–angiotensine (SRA). Le traitement protéolytique par la rénine et l'enzyme de conversion de l'angiotensine génère l'angiotensine II, un effecteur clé qui régule le tonus vasculaire, l'homéostasie du sodium et de l'eau, ainsi que la signalisation endocrine via les voies des récepteurs AT1/AT2. La signalisation en aval recoupe la mobilisation du calcium, les cascades MAPK, les réponses au stress oxydant et des programmes transcriptionnels qui façonnent le remodelage vasculaire et les processus inflammatoires. L'activité dérégulée d'AGT/du SRA est largement étudiée dans la biologie de l'hypertension, la physiopathologie cardiovasculaire et rénale, le stress métabolique et la signalisation associée à la fibrose dans de multiples tissus.

Angiotensinogen Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus AGT dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de AGT. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de AGT. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de AGT.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.