Angiotensinogen Plasmide Double Nickase (h): sc-401013-NIC

L'AGT umano codifica l'angiotensinogeno, il precursore dei peptidi dell'angiotensina prodotto dal fegato che alimentano il sistema renina–angiotensina (RAS). La processazione proteolitica da parte della renina e dell'enzima di conversione dell'angiotensina genera l'angiotensina II, un effettore chiave che regola il tono vascolare, l'omeostasi di sodio e acqua e la segnalazione endocrina attraverso le vie recettoriali AT1/AT2. La segnalazione a valle interseca la mobilizzazione del calcio, le cascate MAPK, le risposte allo stress ossidativo e programmi trascrizionali che modellano il rimodellamento vascolare e i processi infiammatori. L'attività deregolata di AGT/RAS è ampiamente studiata nella biologia dell'ipertensione, nella fisiopatologia cardiovascolare e renale, nello stress metabolico e nella segnalazione associata alla fibrosi in molteplici tessuti.

Angiotensinogen Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus AGT nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di AGT. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di AGT. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con AGT interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.