Plasmide CRISPR d'Activation (h) Angiotensinogen: sc-401013-ACT

L’AGT humain code l’angiotensinogène, une glycoprotéine sécrétée d’origine hépatique qui constitue le précurseur indispensable des peptides angiotensines dans le système rénine–angiotensine (SRA). Le traitement protéolytique de l’angiotensinogène initie des cascades qui régulent le tonus vasculaire, l’équilibre hydrique et électrolytique, ainsi que le remodelage tissulaire via des réseaux de signalisation angiotensine en aval. Au-delà de la signalisation endocrine systémique, l’AGT produit localement soutient une activité paracrine du SRA dans le rein, le système vasculaire, le tissu adipeux et le cerveau, le reliant aux voies du stress oxydatif, de l’inflammation et du renouvellement de la matrice extracellulaire. Une expression dérégulée d’AGT et un déséquilibre du SRA sont associés à la physiopathologie des maladies cardiométaboliques et rénales, offrant un levier mécanistique pour étudier la régulation hémodynamique et le dialogue entre organes dans des modèles cellulaires humains.

Angiotensinogen Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de AGT sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Angiotensinogen Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus AGT dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription AGT, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Angiotensinogen. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus AGT natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Angiotensinogen au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Angiotensinogen dans les cellules tumorales présentant une expression de AGT silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.