Angiotensinogen Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401013-ACT

L’AGT umano codifica l’angiotensinogeno, una glicoproteina secreta di origine epatica che costituisce il precursore obbligato dei peptidi dell’angiotensina nel sistema renina–angiotensina (RAS). La processazione proteolitica dell’angiotensinogeno avvia cascate che regolano il tono vascolare, l’equilibrio dei fluidi e degli elettroliti e il rimodellamento tissutale attraverso reti di segnalazione dell’angiotensina a valle. Oltre alla segnalazione endocrina sistemica, l’AGT prodotto localmente sostiene l’attività paracrina del RAS in rene, vascolatura, tessuto adiposo e cervello, collegandolo a vie legate a stress ossidativo, infiammazione e turnover della matrice extracellulare. Un’espressione disregolata di AGT e uno squilibrio del RAS sono associati alla biologia delle patologie cardiometaboliche e renali, offrendo un appiglio meccanicistico per studiare la regolazione emodinamica e il crosstalk tra organi in modelli cellulari umani.

Angiotensinogen Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di AGT senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Angiotensinogen Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus AGT nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione AGT, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Angiotensinogen. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus AGT nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Angiotensinogen nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Angiotensinogen nelle cellule tumorali con espressione di AGT silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.