Angiotensin Receptor/AT1/AGTR1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400229-ACT

AGTR1 codifica o receptor da angiotensina II do tipo 1 (AT1), um GPCR de sete hélices transmembrana que medeia a maior parte da sinalização canônica da angiotensina II em tecidos cardiovasculares e renais. Após a ligação do ligante, o AT1 acopla-se predominantemente a Gq/11 para ativar a fosfolipase C, mobilizar cálcio e ativar PKC, e também pode envolver as vias MAPK/ERK, JAK/STAT, vias geradoras de ERO (espécies reativas de oxigênio) e sinalização dependente de β-arrestina, que modula a dessensibilização e o tráfego do receptor. Essas cascatas regulam vasoconstrição, secreção de aldosterona, homeostase de sódio e água, remodelamento vascular, inflamação e fibrose. A atividade e a expressão desreguladas de AGTR1 têm sido implicadas em hipertensão, hipertrofia cardíaca, processos ateroscleróticos e remodelamento associado à doença renal crônica, tornando-o um alvo amplamente estudado na biologia da via do SRAA.

Angiotensin Receptor/AT1/AGTR1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de AGTR1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Angiotensin Receptor/AT1/AGTR1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus AGTR1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição AGTR1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Angiotensin Receptor/AT1/AGTR1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus AGTR1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Angiotensin Receptor/AT1/AGTR1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Angiotensin Receptor/AT1/AGTR1 em células tumorais com expressão de AGTR1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.