Plasmide CRISPR d'Activation (h) Angiopoietin 2/Ang-2/ANGPT2: sc-400477-ACT

Le gène humain **ANGPT2** code l’angiopoïétine-2 (Ang-2), un facteur de croissance vasculaire sécrété qui se lie au récepteur tyrosine kinase endothélial **TEK/TIE2** et module la signalisation angiopoïétine–TIE. Ang-2 agit comme un régulateur dépendant du contexte du remodelage vasculaire, de l’activation endothéliale et de la déstabilisation des vaisseaux, en intégrant des signaux liés à l’hypoxie et aux cytokines inflammatoires pour influencer l’intégrité de la barrière et le trafic leucocytaire. Grâce à des interactions croisées avec l’angiogenèse induite par le VEGF et les voies inflammatoires, l’expression d’ANGPT2 contribue à façonner la survie et la migration des cellules endothéliales, ainsi que leurs interactions avec les péricytes. Une dérégulation d’ANGPT2 est associée à une angiogenèse pathologique et à une inflammation vasculaire observées dans les microenvironnements tumoraux, les rétinopathies et les complications vasculaires cardiométaboliques, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques du dysfonctionnement endothélial.

Angiopoietin 2/Ang-2/ANGPT2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ANGPT2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Angiopoietin 2/Ang-2/ANGPT2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ANGPT2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ANGPT2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Angiopoietin 2/Ang-2/ANGPT2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ANGPT2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Angiopoietin 2/Ang-2/ANGPT2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Angiopoietin 2/Ang-2/ANGPT2 dans les cellules tumorales présentant une expression de ANGPT2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.