Plasmide Double Nickase (m) Angiomotin-L2: sc-425094-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) Angiomotin-L2 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Angiomotin-L2 Double Nickase (m) et le plasmide Angiomotin-L2 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Amotl2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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Plasmide Double Nickase (m) Angiomotin-L2 | sc-425094-NIC | 20 µg | $410.00 |
Amotl2 code l’angiomotine-like 2 (Angiomotin-L2), une protéine d’échafaudage localisée aux jonctions cellulaires qui coordonne la polarité, le remodelage du cytosquelette d’actine, ainsi que la morphogenèse endothéliale et épithéliale. Angiomotin-L2 s’interface avec le contrôle, par la voie Hippo, de la localisation de YAP/TAZ et de l’activité transcriptionnelle associée, reliant la tension aux jonctions et la densité cellulaire aux programmes de prolifération et de migration. Dans les systèmes murins, Amotl2 est étudié dans le développement vasculaire, la régulation des barrières et le remodelage tissulaire ; des dérégulations de la signalisation jonctionnelle et de la mécanotransduction sont impliquées dans l’angiogenèse pathologique et des phénotypes d’invasion associés aux tumeurs. Ces fonctions font d’Amotl2 un nœud utile pour disséquer l’inhibition de contact, la dynamique de l’adhérence cellule–cellule et les réseaux de signalisation de la migration.
Angiomotin-L2 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Amotl2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Amotl2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Amotl2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Amotl2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.