Plasmide CRISPR/Cas9 KO ANG III (m): sc-419105

Présentation

Le gène murin **Ang3** code l’angiopoïétine-3 (ANG III), un ligand sécrété de la tyrosine kinase réceptrice **TEK/TIE2**, qui régule le développement vasculaire et l’homéostasie endothéliale. ANG III participe à la signalisation angiopoïétine–TIE, laquelle coordonne, en concertation avec des signaux dépendants du VEGF, la survie des cellules endothéliales, la maturation des vaisseaux, la perméabilité et le remodelage vasculaire. Une activité altérée de la voie des angiopoïétines est associée à une angiogenèse dérégulée et à des réponses vasculaires inflammatoires, pertinentes pour l’étude de la vascularisation tumorale, des lésions ischémiques et des mécanismes des maladies rétinovasculaires. En tant que modulateur dépendant du contexte de la signalisation endothéliale, **Ang3** constitue un point d’entrée exploitable pour analyser le contrôle microenvironnemental de la stabilité vasculaire et de la perfusion tissulaire dans des modèles murins.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ANG III (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ang3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ang3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ang3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ANG III.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ang3 pour l'étude de la signalisation de ANG III, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Ang3 essentiels à la fonction de ANG III
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ang3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ANG III plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le ANG III plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ang3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ANG III plasmide HDR (m) et le ANG III (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ang3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ang3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.