Plasmide CRISPR/Cas9 KO ANG I (h): sc-401766

Présentation

L’angiogénine (ANG), également appelée ANG I, est une protéine sécrétée appartenant à la superfamille de la RNase A, qui régule la signalisation angiogénique et le métabolisme de l’ARN adaptatif au stress. ANG peut se transloquer dans le noyau et stimuler la transcription de l’ARNr, soutenant ainsi la biogenèse des ribosomes et la capacité proliférative ; elle clive également des ARNt afin de générer des fragments induits par le stress qui modulent la traduction. Par ces activités, ANG intègre des signaux extracellulaires à des programmes de maturation/traitement de l’ARN qui influencent le comportement des cellules endothéliales, l’inflammation et la survie cellulaire en situation de stress. Une expression ou une activité dérégulée d’ANG a été associée à un remodelage vasculaire pathologique et à des phénotypes neurodégénératifs, ce qui en fait un nœud d’intérêt pour des études mécanistiques sur l’angiogenèse et les voies de stress liées à l’ARN.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ANG I (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ANG dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ANG, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ANG à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ANG I.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ANG pour l'étude de la signalisation de ANG I, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ANG essentiels à la fonction de ANG I
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ANG pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ANG I plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le ANG I plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ANG. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ANG I plasmide HDR (h) et le ANG I (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ANG pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ANG définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.