Amylase 2a CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400533

Übersicht

AMY2A kodiert die pankreatische α-Amylase 2A, eine sezernierte Hydrolase, die den Abbau von Nahrungsstärke und Glykogen einleitet, indem sie α-1,4-glykosidische Bindungen spaltet und dadurch Maltose sowie Oligosaccharide erzeugt. Als Teil des exokrinen Pankreas-Enzymprogramms trägt Amylase 2a zum Verdauungsstoffwechsel bei und wird im Rahmen der Azinuszell-Differenzierung und von Prozessen des sekretorischen Weges reguliert, einschließlich ER-/Golgi-Transport und reizgekoppelter Enzymfreisetzung. Eine veränderte Amylase-Expression oder -Aktivität wird als molekularer Readout der exokrinen Pankreasfunktion genutzt und häufig in Zusammenhängen von Pankreasentzündungen und Pankreaserkrankungen untersucht, bei denen die Homöostase der Azinuszellen gestört ist. AMY2A dient außerdem als Marker in Studien zur Azinuszell-Identität, zu Stressantworten und zur Regulation von Genen für Verdauungsenzyme.

Das Amylase 2a CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des AMY2A-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des AMY2A-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von AMY2A nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Amylase 2a-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von AMY2A-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Amylase 2a-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf AMY2A-Exone abzielen, die für die Amylase 2a-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere AMY2A-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Amylase 2a CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Amylase 2a CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des AMY2A-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Amylase 2a HDR-Plasmid (h) und Amylase 2a HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von AMY2A-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten AMY2A-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.